蛋白實(shí)驗(yàn)檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)有很多種,WB實(shí)驗(yàn)和ELISA實(shí)驗(yàn)是比較常用的兩種實(shí)驗(yàn)方法,蛋白質(zhì)測(cè)定是指通過(guò)物理或化學(xué)方法對(duì)蛋白質(zhì)含量進(jìn)行測(cè)定。蛋白質(zhì)是生命的物質(zhì)基礎(chǔ),是有機(jī)大分子,是構(gòu)成細(xì)胞的基本有機(jī)物,是生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者。沒(méi)有蛋白質(zhì)就沒(méi)有生命。氨基酸是蛋白質(zhì)的基本組成單位。它是與生命及與各種形式的生命活動(dòng)緊密聯(lián)系在一起的物質(zhì)。機(jī)體中的每一個(gè)細(xì)胞和所有重要組成部分都有蛋白質(zhì)參與。
檢測(cè)方法
分別向甲、乙兩支試管加入3毫升蛋清稀釋液和清水,再依次向兩支試管中加入雙縮脲試劑A液和B液。觀察甲、乙兩試管中溶液發(fā)生的顏色變化。雙縮脲試劑與蛋白質(zhì)呈現(xiàn)紫色反應(yīng)。
蛋白實(shí)驗(yàn)檢測(cè)的時(shí)候無(wú)信號(hào)原因及解決方案
1.用于檢測(cè)的二抗不匹配。解決辦法:需要確定一抗的宿主。
2.一抗二抗的濃度過(guò)低:需要耐心地重新實(shí)驗(yàn)。
3.一抗使用次數(shù)過(guò)多:億康如果過(guò)度稀釋對(duì)信號(hào)檢測(cè)也會(huì)有一定的影響,所以盡量使用新稀釋的一抗。
4.一抗不識(shí)別被檢測(cè)物種中的蛋白質(zhì):可以再檢查以下一抗的特異性。
5.一抗或二抗的孵育時(shí)間太短:可適當(dāng)延長(zhǎng)孵化時(shí)間。
6.凝膠上上樣的蛋白量太少:凝膠上樣品過(guò)少也會(huì)導(dǎo)致信號(hào)弱,所以適當(dāng)增加樣本量也可以防止此現(xiàn)象發(fā)生。
7.檢測(cè)試劑盒不起作用:這種情況出現(xiàn)的較少,實(shí)驗(yàn)中注意試劑盒的有效期是否正常,也可使用陽(yáng)性對(duì)照并確保檢測(cè)試劑盒正常工作。
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